Plasmide CRISPR d'Activation (h) Tom22: sc-402198-ACT

Le gène humain **TOMM22** code **Tom22**, une sous-unité réceptrice centrale du complexe de translocase de la membrane externe mitochondriale (TOM), qui reconnaît les protéines précurseurs mitochondriales codées par le noyau et coordonne leur importation dans les mitochondries. En organisant les interactions avec d’autres récepteurs TOM et avec le canal Tom40, Tom22 contribue à la protéostasie mitochondriale, au maintien de la chaîne respiratoire et à la biogenèse mitochondriale, influençant ainsi le métabolisme énergétique et la signalisation liée à l’apoptose. Des altérations de l’import des protéines mitochondriales et du fonctionnement du complexe TOM sont associées aux réponses au stress cellulaire, à la reprogrammation métabolique et à la dysfonction mitochondriale observées dans divers contextes pathologiques, notamment la neurodégénérescence et l’oncologie. **TOMM22** constitue donc un nœud pertinent pour analyser comment la capacité d’import mitochondrial module l’intégrité de l’organite et les réseaux de signalisation en aval.

Tom22 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TOMM22 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Tom22 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TOMM22 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TOMM22, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Tom22. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TOMM22 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Tom22 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Tom22 dans les cellules tumorales présentant une expression de TOMM22 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.