Plasmide Double Nickase (h) Tom20: sc-400041-NIC

TOMM20 code Tom20, un récepteur central du complexe translocase de la membrane externe mitochondriale (TOM), qui reconnaît les séquences d’adressage mitochondriales N-terminales et initie l’import des protéines codées par le noyau vers les mitochondries. En coordination avec d’autres composants du complexe TOM et les translocases TIM en aval, Tom20 contribue à la biogenèse mitochondriale, à l’assemblage de la chaîne respiratoire et à la protéostasie, influençant ainsi la phosphorylation oxydative, l’homéostasie redox et la signalisation de l’apoptose. Une perturbation de l’import des protéines mitochondriales peut favoriser un stress bioénergétique, des altérations de la dynamique mitochondriale et une activation de l’immunité innée, associées à la neurodégénérescence, à la dysfonction cardiométabolique et au remodelage métabolique lié aux tumeurs. TOMM20 constitue donc un nœud d’intérêt pour étudier les voies de contrôle qualité mitochondriales et les réseaux de signalisation sensibles au stress.

Tom20 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TOMM20 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TOMM20. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TOMM20. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TOMM20.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.