Tom20 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400041

Visão geral

TOMM20 codifica a Tom20, um recetor central do complexo translocase da membrana externa mitocondrial (TOM), que reconhece sequências mitocondriais de direcionamento N-terminais e inicia a importação, para as mitocôndrias, de proteínas codificadas no núcleo. Ao regular a biogénese de proteínas mitocondriais, a Tom20 influencia a fosforilação oxidativa, a dinâmica mitocondrial, a mitofagia e vias de sinalização de stress que moldam o metabolismo e a sobrevivência celular. Alterações na expressão de TOMM20 ou na eficiência de importação mitocondrial têm sido associadas à disfunção mitocondrial observada na neurodegeneração, em doenças cardiometabólicas e na remodelação metabólica associada ao cancro. Assim, a Tom20 é amplamente utilizada como um nó funcional para estudar a homeostase mitocondrial, a proteostase e a comunicação entre organelos e o núcleo.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Tom20 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene TOMM20 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do TOMM20, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do TOMM20 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Tom20.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de TOMM20 para a investigação da sinalização de Tom20, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) TOMM20 críticos para a função Tom20
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos TOMM20 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Tom20 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Tom20 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus TOMM20. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Tom20 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Tom20 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia TOMM20 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo TOMM20 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.