TOK-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406452

Übersicht

BCCIP (auch als TOK-1 bezeichnet) kodiert ein mit BRCA2 und CDKN1A (p21) interagierendes Protein, das die Genomstabilität unterstützt, indem es Replikationsstress-Antworten und DNA-Reparatur koordiniert. Es wird mit Prozessen in Verbindung gebracht, die der homologen Rekombination zugeordnet sind, sowie mit der Stabilität von Replikationsgabeln und der Checkpoint-Kontrolle, wodurch es an Signalwegen beteiligt ist, die während der S-Phase die chromosomale Integrität bewahren. Über funktionelle Interaktionen mit BRCA2 und p21 kann BCCIP den Zellzyklusfortschritt und die Genauigkeit der Auflösung von DNA-Schäden beeinflussen. Eine Fehlregulation oder verminderte Aktivität von BCCIP wird häufig im Zusammenhang mit Phänotypen genomischer Instabilität untersucht, die für die Krebsbiologie und andere Erkrankungen mit beeinträchtigter DNA-Reparatur relevant sind.

Das TOK-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des BCCIP-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des BCCIP-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von BCCIP nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TOK-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von BCCIP-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TOK-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf BCCIP-Exone abzielen, die für die TOK-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere BCCIP-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TOK-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TOK-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des BCCIP-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TOK-1 HDR-Plasmid (h) und TOK-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von BCCIP-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten BCCIP-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.