Plasmide Double Nickase (h) TOCA-1: sc-408893-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) TOCA-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TOCA-1 Double Nickase (h) et le plasmide TOCA-1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant FNBP1L. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) TOCA-1 | sc-408893-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) TOCA-1 | sc-408893-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FNBP1L code TOCA-1, une protéine adaptatrice contenant des domaines F-BAR et SH3, qui couple la détection de la courbure membranaire au remodelage du cytosquelette d’actine. TOCA-1 coordonne le recrutement et l’activation, dépendants de Cdc42, de N-WASP et du complexe Arp2/3, soutenant l’endocytose médiée par la clathrine, le trafic vésiculaire et la formation de structures d’actine dynamiques telles que les filopodes et les invadopodes. Par ces processus, TOCA-1 contribue à la polarité cellulaire, à la migration et à la signalisation dépendante de l’adhérence dans des voies liées aux GTPases Rho et à la régulation de l’actine corticale. Des altérations de la dynamique de l’actine associée à TOCA-1 ont été étudiées dans des contextes incluant une motilité cellulaire modifiée et un comportement invasif, faisant de FNBP1L une cible utile pour des études mécanistiques du contrôle du cytosquelette.
TOCA-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FNBP1L dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FNBP1L. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FNBP1L. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FNBP1L.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.