Plasmide Double Nickase (h) TNIK: sc-401523-NIC

TNIK (TRAF2 and NCK interacting kinase) code une sérine/thréonine kinase de la famille des germinal center kinases, qui intègre des signaux contrôlant l’organisation du cytosquelette, la polarité cellulaire et les programmes transcriptionnels. TNIK agit comme régulateur de la signalisation Wnt/β-caténine via des interactions avec les complexes transcriptionnels TCF/LEF et contribue à des voies influençant l’adhésion, la migration et le développement neuronal. Une activité ou une expression dérégulée de TNIK a été associée à une sortie aberrante de la voie Wnt ainsi qu’à des phénotypes prolifératifs ou invasifs altérés dans de multiples contextes pathologiques, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques du contrôle des réseaux de signalisation. Dans les cellules humaines, TNIK est également étudiée pour ses rôles dans la fonction synaptique et dans le dialogue entre voies de signalisation dépendantes des kinases qui façonne les transitions d’état cellulaire.

TNIK Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TNIK dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TNIK. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TNIK. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TNIK.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.