Particules Lentivirales d'Activation (h) TNF-R2: sc-400709-LAC

TNFRSF1B code le récepteur 2 du facteur de nécrose tumorale (TNF‑R2), un membre de la famille des récepteurs du TNF qui se lie préférentiellement au TNF associé à la membrane et module les réponses inflammatoires ainsi que la réparation tissulaire. La signalisation de TNF‑R2 mobilise les voies NF‑κB canonique et non canonique, ainsi que les voies MAPK et PI3K/AKT, façonnant de manière dépendante du contexte la survie cellulaire, les programmes de cytokines et l’homéostasie immunitaire. L’expression est enrichie dans des sous-populations immunitaires, notamment les lymphocytes T régulateurs, ainsi que dans l’endothélium et certains compartiments stromaux, où elle peut influencer le trafic leucocytaire et les fonctions de barrière. Une activité dérégulée de TNFRSF1B a été associée à des affections auto-immunes et inflammatoires chroniques, à la neuroinflammation et à la biologie du microenvironnement tumoral, ce qui soutient des études mécanistiques sur les interactions entre voies du TNF et les conséquences d’une signalisation spécifique du récepteur.

Les particules d'activation lentivirales TNF-R2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TNFRSF1B dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TNF-R2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TNFRSF1B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TNF-R2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TNFRSF1B ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.