Plasmide CRISPR/Cas9 KO TNF-R2 (m): sc-423443

Présentation

Tnfrsf1b code le TNF‑R2 (TNFRSF1B), un récepteur du TNF principalement exprimé par les cellules immunitaires, endothéliales et certaines populations de cellules stromales, qui répond préférentiellement au TNF membranaire. La signalisation via le TNF‑R2 mobilise des protéines adaptatrices afin de réguler l’activité des voies NF‑κB et MAPK, orientant les programmes de survie cellulaire, les réponses cytokinique et le remodelage tissulaire. En biologie des lymphocytes, le TNF‑R2 est étroitement associé à la stabilité des lymphocytes T régulateurs et à une signalisation induite par l’activation qui module l’équilibre inflammatoire. Une activité dérégulée de l’axe TNF‑R2 a été impliquée dans des modèles d’inflammation chronique, d’auto-immunité et de processus neuro-inflammatoires, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de la spécificité des voies du TNF.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TNF-R2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tnfrsf1b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tnfrsf1b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tnfrsf1b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TNF-R2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tnfrsf1b pour l'étude de la signalisation de TNF-R2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tnfrsf1b essentiels à la fonction de TNF-R2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tnfrsf1b pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TNF-R2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TNF-R2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tnfrsf1b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TNF-R2 plasmide HDR (m) et le TNF-R2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tnfrsf1b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tnfrsf1b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.