Plasmide CRISPR/Cas9 KO TNFα-IP 2 (m): sc-423435

Présentation

Tnfaip2 code la protéine 2 induite par le TNFα (TNFα‑IP 2), un facteur sensible aux cytokines impliqué dans la signalisation inflammatoire et le remodelage du comportement cellulaire lors de l’activation immunitaire. Son expression est induite en aval des voies TNFα/NF‑κB et apparentées, et elle a été associée à la régulation de la dynamique du cytosquelette, du trafic membranaire et de la migration dans des contextes myéloïdes et endothéliaux. Dans les systèmes murins, TNFα‑IP 2 est fréquemment utilisée comme marqueur (readout) de programmes transcriptionnels pro‑inflammatoires et comme nœud reliant les signaux de l’immunité innée à des modifications de l’adhérence et de la motilité. Une dérégulation de la signalisation associée à TNFα‑IP 2 a été étudiée dans le cadre de l’inflammation chronique et de la biologie du microenvironnement associé aux tumeurs, ce qui étaye son intérêt pour disséquer les interactions inflammation–cancer, sans préjuger de résultats cliniques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TNFα-IP 2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tnfaip2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tnfaip2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tnfaip2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TNFα-IP 2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tnfaip2 pour l'étude de la signalisation de TNFα-IP 2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tnfaip2 essentiels à la fonction de TNFα-IP 2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tnfaip2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TNFα-IP 2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TNFα-IP 2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tnfaip2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TNFα-IP 2 plasmide HDR (m) et le TNFα-IP 2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tnfaip2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tnfaip2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.