Plasmide CRISPR d'Activation (h) TMPRSS4: sc-416288-ACT

TMPRSS4 (protéase transmembranaire à sérine 4) est une protéase à sérine transmembranaire de type II exprimée à la surface cellulaire, où elle peut moduler la protéolyse péricellulaire, le remodelage de la matrice extracellulaire et le comportement des cellules épithéliales. En influençant la signalisation activée par des protéases ainsi que les interactions cellule–cellule ou cellule–matrice, TMPRSS4 est associée à des processus tels que la migration, l’invasion et la transition épithélio-mésenchymateuse. Une expression altérée de TMPRSS4 a été rapportée dans de multiples contextes de tumeurs solides et est fréquemment associée à des phénotypes agressifs et à un potentiel métastatique, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques des programmes liés à l’invasion. TMPRSS4 est également pertinente pour la recherche sur les réseaux de protéases ancrées à la membrane qui régulent le processing des récepteurs et la signalisation en aval dans les tissus épithéliaux.

TMPRSS4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TMPRSS4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TMPRSS4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TMPRSS4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TMPRSS4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TMPRSS4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TMPRSS4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TMPRSS4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TMPRSS4 dans les cellules tumorales présentant une expression de TMPRSS4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.