Plasmide CRISPR d'Activation (h) TMPRSS2: sc-402828-ACT

TMPRSS2 (protéase transmembranaire à sérine 2) code une protéase à sérine transmembranaire de type II, exprimée de manière particulièrement marquée dans la prostate et l’épithélium des voies respiratoires, où elle contribue à la protéolyse péricellulaire et à l’homéostasie épithéliale. Sa transcription est régulée par la signalisation du récepteur des androgènes, ce qui relie l’expression de TMPRSS2 aux réseaux de gènes sensibles aux hormones et aux programmes de différenciation épithéliale. TMPRSS2 est largement étudiée pour son rôle dans le traitement, médié par des protéases, de substrats de surface cellulaire et sécrétés, ainsi que pour sa modulation de voies impliquées dans le remodelage tissulaire et les réponses inflammatoires. Une expression dérégulée de TMPRSS2 et des fusions géniques associées à TMPRSS2 sont pertinentes pour la biologie du cancer de la prostate, et l’activité protéolytique dépendante de TMPRSS2 est impliquée dans les interactions hôte–pathogène dans des modèles de recherche respiratoire.

TMPRSS2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TMPRSS2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TMPRSS2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TMPRSS2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TMPRSS2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TMPRSS2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TMPRSS2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TMPRSS2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TMPRSS2 dans les cellules tumorales présentant une expression de TMPRSS2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.