TMPRSS2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402828-ACT

TMPRSS2（トランスメンブレン型セリンプロテアーゼ2）は、II型膜貫通セリンプロテアーゼをコードする遺伝子で、前立腺および気道上皮で高発現し、細胞周囲のタンパク質分解（ペリセルラー・プロテオリシス）や上皮の恒常性維持に寄与します。その転写はアンドロゲン受容体シグナルによって制御されており、TMPRSS2発現がホルモン応答性の遺伝子ネットワークや上皮分化プログラムと結び付いています。TMPRSS2は、細胞表面および分泌性基質のプロテアーゼ依存的なプロセシングにおける役割や、組織リモデリングおよび炎症応答に関与する経路の調節作用により、広く研究されています。TMPRSS2の発現異常やTMPRSS2関連遺伝子融合は前立腺がんの生物学的理解に重要であり、TMPRSS2依存的なタンパク質分解活性は、呼吸器研究モデルにおける宿主—病原体相互作用にも関与するとされています。

TMPRSS2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TMPRSS2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TMPRSS2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TMPRSS2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTMPRSS2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TMPRSS2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTMPRSS2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTMPRSS2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTMPRSS2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTMPRSS2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。