Plasmide Double Nickase (h) TMPRSS11A: sc-415530-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) TMPRSS11A correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TMPRSS11A Double Nickase (h) et le plasmide TMPRSS11A Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TMPRSS11A. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (h) TMPRSS11A | sc-415530-NIC | 20 µg | $410.00 |
TMPRSS11A code une protéase à sérine transmembranaire de type II exprimée à la surface des épithéliums, où elle contribue à la protéolyse péricellulaire et au remodelage, dépendant des protéases, du milieu extracellulaire. Grâce au clivage régulé de substrats protéiques au niveau de la membrane cellulaire, TMPRSS11A peut influencer l’homéostasie de la barrière épithéliale, les programmes de différenciation et les cascades de signalisation inflammatoire associées aux réponses des muqueuses. Une expression altérée de TMPRSS11A a été rapportée dans les épithéliums des voies respiratoires et du tractus gastro-intestinal, et a été étudiée dans le contexte d’états de stress épithélial et de réseaux de protéases associés aux tumeurs. Ces propriétés font de TMPRSS11A une cible utile pour étudier la fonction des protéases ancrées à la membrane, la signalisation protéolytique et la biologie épithéliale.
TMPRSS11A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TMPRSS11A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TMPRSS11A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TMPRSS11A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TMPRSS11A.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.