Plasmide CRISPR/Cas9 KO TMEM88 (h): sc-405789

Présentation

TMEM88 code une petite protéine transmembranaire impliquée dans la régulation de la signalisation Wnt, en modulant la transduction du signal dépendante de Dishevelled et en influençant les programmes transcriptionnels pilotés par la β-caténine. Par ses effets sur l’activité de la voie, TMEM88 peut façonner des processus cellulaires tels que la prolifération, la différenciation, la polarité et les dynamiques épithélio-mésenchymateuses. Une expression altérée de TMEM88 ou des changements du contexte de la voie ont été associés à une activité Wnt dérégulée dans plusieurs contextes pertinents pour la maladie, notamment le cancer et le remodelage tissulaire. Dans des systèmes modèles humains, la perturbation de TMEM88 est utilisée pour explorer des points de contrôle proches de la membrane qui ajustent l’amplitude de la voie Wnt et les réseaux d’expression génique en aval.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TMEM88 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TMEM88 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TMEM88, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TMEM88 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TMEM88.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TMEM88 pour l'étude de la signalisation de TMEM88, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TMEM88 essentiels à la fonction de TMEM88
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TMEM88 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TMEM88 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TMEM88 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TMEM88. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TMEM88 plasmide HDR (h) et le TMEM88 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TMEM88 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TMEM88 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.