Particules Lentivirales d'Activation (h) TMEM5: sc-411455-LAC

TMEM5 code une glycosyltransférase transmembranaire résidente de l’appareil de Golgi, nécessaire à la modification post-traductionnelle de l’α-dystroglycane, un récepteur clé reliant la matrice extracellulaire au cytosquelette. En contribuant à l’assemblage de glycannes O-mannosylés fonctionnels, TMEM5 participe à la régulation de l’adhérence cellule–matrice, des interactions avec la membrane basale et des processus de signalisation qui soutiennent l’architecture tissulaire. La perturbation de cette voie de glycosylation compromet la liaison de l’α-dystroglycane à ses ligands et est associée à des phénotypes de dystroglycanopathie, ce qui met en évidence TMEM5 comme un nœud important de la biologie neuromusculaire et du développement dépendante de la glycosylation. Par conséquent, TMEM5 est fréquemment étudié dans les domaines de la glycobiologie, du trafic golgien et de l’organisation de la matrice extracellulaire.

Les particules d'activation lentivirales TMEM5 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TMEM5 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TMEM5 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TMEM5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TMEM5. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TMEM5 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.