Particules Lentivirales d'Activation (h) TMEM45A: sc-412437-LAC

TMEM45A code pour la protéine transmembranaire 45A, une protéine membranaire multipasse encore mal caractérisée, enrichie dans les épithéliums hypoxiques et kératinisants et associée à l’adaptation cellulaire au stress dû à une faible disponibilité en oxygène. Les fonctions rapportées relient TMEM45A au trafic membranaire et à l’organisation de la voie sécrétoire, avec des effets en aval sur les programmes de différenciation épithéliale et les réseaux transcriptionnels sensibles au stress. Une expression altérée de TMEM45A a été associée à des modifications de la survie cellulaire et de phénotypes invasifs dans des modèles tumoraux, ce qui soutient sa pertinence pour la signalisation induite par l’hypoxie et la plasticité épithéliale. Ces propriétés font de TMEM45A une cible utile pour étudier les réponses au stress du microenvironnement, la biologie des tissus barrière et les mécanismes de régulation génique dans les cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TMEM45A (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TMEM45A dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TMEM45A (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TMEM45A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TMEM45A. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TMEM45A ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.