Particules Lentivirales d'Activation (h) TMEM38B: sc-412461-LAC

TMEM38B code une protéine membranaire multipasse du réticulum endoplasmique qui forme un canal cationique impliqué dans la régulation de la gestion intracellulaire du calcium. En modulant le flux de Ca2+ et en couplant la dynamique du calcium du RE aux voies de signalisation de l’excitation–contraction et de l’adaptation au stress, TMEM38B peut influencer des processus tels que l’homéostasie du calcium, la fonction du RE et des programmes transcriptionnels en aval. Une altération génétique de TMEM38B a été associée à des phénotypes squelettiques, notamment à certaines formes d’ostéogenèse imparfaite, soulignant son importance pour la biologie osseuse et l’intégrité des tissus conjonctifs. Ces propriétés font de TMEM38B une cible utile pour étudier la signalisation dépendante du calcium, les voies liées au RE et les relations génotype–phénotype dans des modèles cellulaires humains.

Les particules d'activation lentivirales TMEM38B (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TMEM38B dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TMEM38B (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TMEM38B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TMEM38B. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TMEM38B ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.