Plasmide CRISPR d'Activation (h2) TMEM215: sc-408002-ACT-2

Le gène humain TMEM215 code la protéine transmembranaire 215, une protéine membranaire multipasse prédite, supposée se localiser aux membranes cellulaires où elle pourrait contribuer à l’organisation membranaire, à des processus associés au transport ou à une régulation de l’homéostasie cellulaire dépendante de la signalisation. Bien que TMEM215 reste imparfaitement caractérisé, des données d’expression et d’associations génétiques l’ont relié à des voies impliquées dans la prolifération cellulaire, la différenciation et les réponses au stress, ce qui suggère des rôles dépendants du contexte dans la physiologie des tissus. Des modifications des profils d’expression de TMEM215 ont été rapportées dans des jeux de données liés aux maladies, notamment le cancer et d’autres troubles complexes, ce qui étaye son intérêt comme cible pour des études de génomique fonctionnelle portant sur la biologie des protéines membranaires. L’édition génétique de TMEM215 permet d’interroger des approches de perte ou de gain de fonction concernant la localisation subcellulaire, les interactions protéine–protéine ainsi que les effets transcriptionnels ou phénotypiques en aval dans des modèles de cellules humaines.

TMEM215 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TMEM215 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TMEM215 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TMEM215 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TMEM215, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TMEM215. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TMEM215 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TMEM215 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TMEM215 dans les cellules tumorales présentant une expression de TMEM215 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.