Particules Lentivirales d'Activation (h) TMEM205: sc-408587-LAC

TMEM205 code une protéine transmembranaire multipasse qui se localise aux membranes cellulaires et aurait un rôle dans la régulation du trafic intracellulaire et des processus de transport associés aux membranes. Une expression modifiée de TMEM205 a été associée à des changements dans la gestion du stress cellulaire et dans des phénotypes de transport des médicaments, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de l’adaptation des cellules tumorales et des mécanismes de chimiorésistance. En tant que protéine membranaire dont la fonction est encore peu annotée, TMEM205 est souvent étudiée via des perturbations d’expression afin de définir les connexions entre voies, notamment ses effets sur la dynamique vésiculaire, la perméabilité membranaire et les programmes de réponse cellulaire. Ces caractéristiques font de TMEM205 une cible utile pour la génomique fonctionnelle en biologie du cancer et en recherche sur la physiologie cellulaire.

Les particules d'activation lentivirales TMEM205 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TMEM205 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TMEM205 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TMEM205, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TMEM205. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TMEM205 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.