Particules Lentivirales d'Activation (h) TMEM192: sc-415021-LAC

TMEM192 code une protéine transmembranaire multipasse qui se localise principalement aux endosomes tardifs et aux lysosomes, où elle est utilisée comme marqueur des membranes lysosomales et est impliquée dans l’organisation membranaire et l’homéostasie des organites. En influençant des processus liés aux lysosomes tels que le trafic vésiculaire, le renouvellement des cargaisons et les réponses au stress cellulaire, TMEM192 peut moduler des voies associées au fonctionnement autophagie–lysosome et à la maturation endolysosomale. La dérégulation de la dynamique lysosomale et de la protéostasie est pertinente pour des mécanismes étudiés dans la neurodégénérescence, le stress métabolique et l’adaptation des cellules cancéreuses, ce qui fait de TMEM192 un point d’entrée utile pour explorer des phénotypes centrés sur les organites. La mesure des modifications liées à TMEM192 de l’abondance lysosomale, de l’acidification et du trafic peut étayer des études sur l’élimination du protéome et le remodelage des compartiments intracellulaires.

Les particules d'activation lentivirales TMEM192 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TMEM192 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TMEM192 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TMEM192, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TMEM192. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TMEM192 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.