TMEM191B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-417493-ACT

TMEM191B は、ヒト細胞において機能アノテーションが限られている、複数回膜貫通型タンパク質をコードすると予測されています。このことから、膜構造の維持や区画特異的なシグナル伝達に関連する役割が示唆されます。トランスクリプトーム解析では、TMEM191B が、輸送（トラフィッキング）、プロテオスタシス、ストレス応答性経路と交差する細胞状態制御プログラムに関与する可能性が示されています。これらの場面では、膜タンパク質が受容体の利用可能性やシグナル伝播を調節することがよくあります。さらに、いくつかの疾患関連データセットで発現パターンの変化が観察されており、TMEM191B は広く必須な遺伝子というより、状況依存的な調節因子として検討する価値が支持されます。実験的に発現を上昇させることで、免疫系・上皮・がんのモデル系における下流の転写応答、相互作用因子、経路の連結性を明確化するのに役立ちます。

TMEM191B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TMEM191Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TMEM191B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TMEM191B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTMEM191B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TMEM191Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTMEM191B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTMEM191B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTMEM191B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTMEM191B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。