Plasmide CRISPR/Cas9 KO TMEM182 (m): sc-436273

Présentation

Tmem182 code TMEM182, une protéine transmembranaire prédite à passages multiples, dont l’expression est enrichie dans le muscle squelettique et associée à des programmes de différenciation myogénique. Bien que sa fonction moléculaire reste imparfaitement caractérisée, TMEM182 a été reliée à des processus de signalisation associés aux membranes et de remodelage cellulaire qui accompagnent le développement et la régénération musculaires. Des études transcriptomiques ont rapporté une régulation de Tmem182 dans des contextes impliquant l’adaptation métabolique et des signaux inflammatoires, ce qui suggère une pertinence pour des voies modulant l’homéostasie musculaire et les réponses au stress. Une expression dérégulée a été observée dans des phénotypes liés au muscle et dans des modèles expérimentaux de remodelage tissulaire, étayant son utilisation comme cible pour des études mécanistiques en biologie musculosquelettique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TMEM182 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tmem182 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tmem182, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tmem182 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TMEM182.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tmem182 pour l'étude de la signalisation de TMEM182, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tmem182 essentiels à la fonction de TMEM182
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tmem182 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TMEM182 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TMEM182 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tmem182. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TMEM182 plasmide HDR (m) et le TMEM182 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tmem182 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tmem182 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.