TMEM173 Lentiviral Activation Particles (m): sc-428364-LAC

Das murine Gen Tmem173 kodiert TMEM173 (auch als STING bekannt), einen Adapter des endoplasmatischen Retikulums, der die zytosolische DNA-Erkennung mit der angeborenen Immun-Signalübertragung koppelt. Nach Bindung zyklischer Dinukleotide, die durch cGAS oder bakterielle Enzyme erzeugt werden, fördert TMEM173 die Aktivierung von TBK1 und IRF3 und kann NF-κB-Programme einbinden, wodurch Typ-I-Interferon- und entzündliche transkriptionelle Antworten ausgelöst werden. Dieser Signalweg ist mit Autophagie, Zelltod und Signalwegen des metabolischen Stresses verknüpft und wird häufig zur Modellierung von Wirtsabwehrmechanismen verwendet. Eine fehlregulierte TMEM173-Signalgebung wird mit interferongetriebenen entzündlichen Phänotypen in Verbindung gebracht und trägt in vielfältigen murinen Krankheitsmodellen zum Tumor–Immun-Crosstalk sowie zu Antworten auf zytosolische Nukleinsäuren bei.

TMEM173 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Tmem173-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

TMEM173 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Tmem173-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen TMEM173-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Tmem173-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.