Particules Lentivirales d'Activation (m) TMEM173: sc-428364-LAC

Le gène murin *Tmem173* code TMEM173 (également connu sous le nom de STING), un adaptateur du réticulum endoplasmique qui couple la détection d’ADN cytosolique à la signalisation de l’immunité innée. Lorsqu’il se lie à des dinucléotides cycliques générés par cGAS ou par des enzymes bactériennes, TMEM173 favorise l’activation de TBK1 et d’IRF3 et peut engager des programmes NF-κB, induisant des réponses transcriptionnelles de type I interféron et inflammatoires. Cette voie est interconnectée avec l’autophagie, la mort cellulaire et la signalisation du stress métabolique, et est largement utilisée pour modéliser les mécanismes de défense de l’hôte. Une signalisation TMEM173 dérégulée est impliquée dans des phénotypes inflammatoires pilotés par les interférons et contribue au dialogue tumeur–système immunitaire ainsi qu’aux réponses aux acides nucléiques cytosoliques dans divers modèles murins de maladie.

Les particules d'activation lentivirales TMEM173 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Tmem173 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TMEM173 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Tmem173, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TMEM173. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Tmem173 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.