Plasmide Double Nickase (m) TMEM173: sc-428364-NIC

Tmem173 code pour TMEM173 (également appelé STING), un adaptateur résident du réticulum endoplasmique qui coordonne la détection immunitaire innée de l’ADN cytosolique. Lorsqu’il se lie aux dinucléotides cycliques produits par cGAS, TMEM173 déclenche la signalisation TBK1–IRF3 et l’activation de NF-κB, favorisant les programmes d’expression génique de l’interféron de type I et de l’inflammation. Cette voie s’entrecroise avec l’autophagie et les réponses au stress cellulaire, et module la défense antivirale, les réponses aux bactéries intracellulaires ainsi que la signalisation du microenvironnement tumoral–immunitaire dans des modèles murins. Une signalisation TMEM173 dérégulée a été associée à une inflammation aberrante et à des phénotypes de type auto-immun, ce qui en fait une cible fréquente dans les études d’immunopathologie et d’interactions hôte–pathogène.

TMEM173 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Tmem173 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Tmem173. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Tmem173. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Tmem173.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.