Particules Lentivirales d'Activation (h2) TMEM171: sc-408549-LAC-2

Le gène humain TMEM171 code la protéine transmembranaire 171, une protéine membranaire multipasse prédite, enrichie au niveau des membranes cellulaires, où l’on pense qu’elle influence l’organisation membranaire et le trafic intracellulaire. Bien que ses partenaires moléculaires et ses effets sur la signalisation restent imparfaitement définis, TMEM171 est étudiée dans le cadre de processus associés aux membranes, tels que le transport vésiculaire, la compartimentation des complexes de signalisation et la régulation des interactions cellule–cellule ou cellule–matrice. Une expression altérée de TMEM171 a été rapportée dans plusieurs jeux de données transcriptomiques pertinents pour diverses maladies, ce qui motive l’étude de la manière dont des dynamiques membranaires dépendantes de TMEM171 peuvent affecter la prolifération, la différenciation et les réponses au stress. L’édition génomique de TMEM171 permet une dissection fonctionnelle de ce facteur membranaire encore peu étudié, notamment via des analyses de perte de fonction, la cartographie de domaines et des études de localisation visant à relier TMEM171 à des voies et à des phénotypes spécifiques dans des modèles de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TMEM171 (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TMEM171 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TMEM171 (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TMEM171, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TMEM171. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TMEM171 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.