Plasmide CRISPR d'Activation (h) TMEM171: sc-408549-ACT

TMEM171 code une protéine transmembranaire multipasse prédite, dont l’annotation fonctionnelle dans les cellules humaines demeure limitée, ce qui suggère un rôle dans l’organisation, au niveau des membranes, de processus de signalisation ou de transport. En tant que composant membranaire putatif, TMEM171 est souvent étudié dans le contexte de la compartimentation subcellulaire, du trafic des protéines et de la régulation de programmes d’état cellulaire dépendant de microenvironnements membranaires. Des études transcriptomiques ont rapporté une expression variable de TMEM171 selon les tissus et les ensembles de données liés aux maladies, ce qui appuie son utilisation comme gène candidat dans des analyses mécanistiques de la dérégulation des voies. Les recherches en cours exploitent la perturbation de TMEM171 afin de préciser les liens entre les réseaux de protéines membranaires, l’homéostasie cellulaire et des phénotypes pertinents pour des troubles complexes.

TMEM171 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TMEM171 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TMEM171 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TMEM171 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TMEM171, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TMEM171. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TMEM171 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TMEM171 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TMEM171 dans les cellules tumorales présentant une expression de TMEM171 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.