TMEM14B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-418197

Übersicht

TMEM14B kodiert ein vorhergesagtes Multi-Pass-Transmembranprotein, das in intrazellulären Membranen angereichert ist und mit der mitochondrialen Homöostase sowie membranassoziierten Stoffwechselprozessen in Verbindung steht. Als Mitglied der TMEM14-Familie wird es häufig im Zusammenhang mit Organellendynamik, Redox-Gleichgewicht und der Regulation der Apoptose unter zellulären Stressbedingungen untersucht. Eine veränderte TMEM14B-Expression wurde in transkriptomischen Signaturen verschiedener Krebsarten und anderer proliferativer Zustände beschrieben, was auf eine Relevanz für Signalwege hindeutet, die mitochondriale Funktion mit Zellwachstum und Überleben koppeln. Diese Eigenschaften machen TMEM14B zu einem nützlichen Ziel, um mitochondrienverknüpfte Signalnetzwerke und Stressanpassungsprogramme in menschlichen Zellen zu analysieren.

Das TMEM14B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TMEM14B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TMEM14B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TMEM14B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TMEM14B-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TMEM14B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TMEM14B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TMEM14B-Exone abzielen, die für die TMEM14B-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TMEM14B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TMEM14B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TMEM14B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TMEM14B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TMEM14B HDR-Plasmid (h) und TMEM14B HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TMEM14B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TMEM14B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.