Plasmide CRISPR/Cas9 KO TMEM134 (h): sc-406513

Présentation

TMEM134 code la protéine transmembranaire 134, une protéine membranaire multipasse prédite, supposée se localiser dans des compartiments membranaires intracellulaires et contribuer à l’organisation et au trafic membranaires. Bien que ses partenaires moléculaires ne soient pas entièrement caractérisés, TMEM134 a été associée à des processus dépendant de la dynamique du système endomembranaire, notamment le tri des protéines, le renouvellement des récepteurs et la signalisation induite par le stress. Des modifications des profils d’expression de TMEM134 ont été rapportées dans des études transcriptomiques dans plusieurs contextes pathologiques, ce qui appuie son utilisation comme régulateur candidat de voies liées à l’homéostasie cellulaire. L’étude fonctionnelle de TMEM134 est donc utile pour disséquer les mécanismes associés aux membranes qui modulent les sorties de signalisation, la prolifération et la survie dans des modèles cellulaires humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TMEM134 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TMEM134 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TMEM134, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TMEM134 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TMEM134.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TMEM134 pour l'étude de la signalisation de TMEM134, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TMEM134 essentiels à la fonction de TMEM134
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TMEM134 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TMEM134 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TMEM134 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TMEM134. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TMEM134 plasmide HDR (h) et le TMEM134 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TMEM134 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TMEM134 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.