TMEM125 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-414318-LAC

TMEM125 codifica una proteina transmembrana multipasso con una caratterizzazione funzionale limitata, riportata come localizzata a membrane intracellulari e implicata nella regolazione del traffico vescicolare e della segnalazione associata alle membrane. In quanto potenziale organizzatore di membrane, TMEM125 viene studiata nel contesto dell’omeostasi degli organelli, dello smistamento proteico e delle risposte allo stress cellulare che influenzano proliferazione e sopravvivenza. L’espressione alterata di regolatori transmembrana come TMEM125 è spesso analizzata in dataset trascrittomici per valutarne associazioni con vie oncogeniche, segnalazione immunitaria e adattamento metabolico. Queste caratteristiche rendono TMEM125 un bersaglio utile per studi meccanicistici che collegano la dinamica delle membrane alla modulazione delle vie di segnalazione e a fenotipi rilevanti per la malattia nelle cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TMEM125 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di TMEM125 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TMEM125 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione TMEM125, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di TMEM125. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo TMEM125 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.