Plásmido CRISPR de Activación (h) TMEFF1: sc-404818-ACT

TMEFF1 humano (proteína transmembrana con un dominio tipo EGF y dos dominios tipo folistatina 1) codifica una proteína de membrana de paso único implicada en interacciones con ligandos extracelulares y en la modulación de la señalización de factores de crecimiento. Las funciones descritas vinculan a TMEFF1 con la regulación de programas de proliferación y diferenciación celular, con efectos dependientes del contexto sobre vías de receptores tirosina quinasa como EGFR/ERK y la señalización PI3K–AKT. La expresión de TMEFF1 se encuentra con frecuencia desregulada en múltiples tipos de tumores y se ha asociado con cambios en los estados epiteliales, la invasividad y la señalización del microambiente. Estas características hacen de TMEFF1 una diana útil para estudiar la integración de señales en la membrana plasmática y las consecuencias transcripcionales de la alteración de las vías de factores de crecimiento.

TMEFF1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TMEFF1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TMEFF1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TMEFF1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TMEFF1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TMEFF1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TMEFF1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TMEFF1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TMEFF1 en células tumorales con expresión de TMEFF1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.