Plasmide CRISPR/Cas9 KO TM4SF19 (h): sc-406884

Présentation

TM4SF19 (transmembrane 4 L six family member 19) code une protéine membranaire de type tétraspanine, supposée organiser des microdomaines membranaires et moduler les interactions cellule–cellule ou cellule–matrice. En tant que membre de la famille TM4SF, TM4SF19 est associé à des processus tels que le regroupement des récepteurs, la transduction du signal à la membrane plasmique et la régulation de voies liées à l’adhésion qui influencent la migration et l’organisation épithéliale. Une expression altérée des protéines TM4SF a été rapportée dans de multiples contextes cancéreux, ce qui justifie l’étude de TM4SF19 en biologie tumorale, dans les phénotypes d’invasion et la signalisation du microenvironnement. Les études de perturbation de TM4SF19 peuvent également éclairer les mécanismes de trafic des protéines membranaires et la composition du « surfaceome » dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TM4SF19 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TM4SF19 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TM4SF19, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TM4SF19 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TM4SF19.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TM4SF19 pour l'étude de la signalisation de TM4SF19, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TM4SF19 essentiels à la fonction de TM4SF19
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TM4SF19 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TM4SF19 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TM4SF19 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TM4SF19. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TM4SF19 plasmide HDR (h) et le TM4SF19 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TM4SF19 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TM4SF19 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.