Plasmide Double Nickase (m) TLR9: sc-429882-NIC

Le gène murin *Tlr9* code le récepteur Toll-like 9 (TLR9), un récepteur endosomal de reconnaissance des motifs moléculaires (PRR) qui détecte les motifs CpG non méthylés dans l’ADN d’origine microbienne et dans l’ADN endogène. Après la liaison du ligand et la maturation endosomale, TLR9 signale principalement via MYD88 pour activer les cascades IRAK–TRAF6, induisant une transcription dépendante de NF-κB et d’IRF7 des cytokines pro-inflammatoires et des interférons de type I. Cette voie coordonne l’activation de l’immunité innée dans les macrophages, les cellules dendritiques et les lymphocytes B, en modulant la présentation de l’antigène et la polarisation de la réponse immunitaire adaptative. Une signalisation TLR9 dérégulée a été impliquée, dans des modèles murins, dans des phénotypes inflammatoires et auto-immuns, des réponses aberrantes aux acides nucléiques et des interactions entre tumeurs et système immunitaire.

TLR9 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Tlr9 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Tlr9. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Tlr9. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Tlr9.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.