Plasmide CRISPR/Cas9 KO TLR6 (h): sc-401996

Présentation

TLR6 code le récepteur Toll-like 6, un récepteur de reconnaissance des motifs (PRR) qui forme principalement un hétérodimère avec TLR2 afin de détecter des lipoprotéines microbiennes et des ligands apparentés au niveau de la membrane plasmique et des interfaces endosomales. La liaison du ligand déclenche une signalisation dépendante de MyD88, qui active des cascades IRAK–TRAF6, entraînant l’activation des voies NF-κB et MAPK et orientant les programmes de cytokines et de chimiokines dans les cellules de l’immunité innée. L’activité de TLR6 influence le dialogue avec la signalisation des récepteurs de type NOD et peut moduler les états d’amorçage de l’inflammasome, reliant la détection des agents pathogènes à des réseaux transcriptionnels inflammatoires plus larges. Une signalisation TLR6 altérée a été associée à une susceptibilité accrue aux infections et à une inflammation dérégulée, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de l’homéostasie immunitaire et des mécanismes des maladies inflammatoires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TLR6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TLR6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TLR6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TLR6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TLR6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TLR6 pour l'étude de la signalisation de TLR6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TLR6 essentiels à la fonction de TLR6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TLR6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TLR6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TLR6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TLR6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TLR6 plasmide HDR (h) et le TLR6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TLR6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TLR6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.