Plasmide Double Nickase (h) TLR5: sc-401154-NIC

Le récepteur de type Toll 5 (TLR5) est un récepteur de reconnaissance des motifs (PRR) exprimé à la surface des cellules, qui détecte la flagelline bactérienne et déclenche la signalisation de l’immunité innée dans les cellules épithéliales et les lignées myéloïdes. Après liaison du ligand, TLR5 transmet principalement le signal via MYD88, activant des cascades IRAK–TRAF6 qui aboutissent à l’activation des voies NF-κB et MAPK ainsi qu’à l’induction de cytokines et de chimiokines pro-inflammatoires. TLR5 contribue à la défense de l’hôte au niveau des muqueuses et à l’homéostasie entre microbiote et système immunitaire, et une activité TLR5 altérée a été associée à des troubles inflammatoires, à une susceptibilité accrue aux infections et à l’inflammation liée aux tumeurs. La spécificité bien caractérisée de sa réponse au ligand fait de TLR5 un point d’entrée utile pour analyser les interactions entre PRR, les programmes cytokiniques et les mécanismes d’immunité des barrières.

TLR5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TLR5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TLR5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TLR5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TLR5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.