Particules Lentivirales d'Activation (h) TLR4: sc-400068-LAC

Le TLR4 humain (Toll-like receptor 4) est un récepteur de reconnaissance des motifs qui détecte le lipopolysaccharide et des ligands microbiens apparentés ou associés aux dommages, afin d’initier la signalisation de l’immunité innée. Lors de son activation, TLR4 engage des voies dépendantes de MYD88 et de TRIF, déclenchant des programmes NF-κB, MAPK et IRF3 qui régulent les cytokines pro-inflammatoires et les réponses à l’interféron de type I. La signalisation de TLR4 influence l’activation myéloïde, la présentation d’antigènes et le tonus inflammatoire des tissus, l’associant à la défense de l’hôte ainsi qu’à l’inflammation dysrégulée. L’activité altérée de TLR4 et les profils transcriptionnels en aval sont fréquemment étudiés en biologie du sepsis, dans les mécanismes des maladies inflammatoires chroniques, l’inflammation métabolique et les recherches sur le microenvironnement tumoral–immunitaire.

Les particules d'activation lentivirales TLR4 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TLR4 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TLR4 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TLR4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TLR4. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TLR4 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.