TLR4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (bovine): sc-437333

Panoramica

Il recettore Toll-like 4 (TLR4) è un recettore di riconoscimento di pattern (pattern-recognition receptor) che rileva il lipopolisaccaride e altri ligandi associati a patogeni e a danno cellulare, avviando la segnalazione dell’immunità innata nelle cellule mieloidi ed epiteliali bovine. Il legame con il ligando attiva vie dipendenti da MyD88 e TRIF, con conseguente attivazione dei programmi trascrizionali di NF-κB e IRF che regolano citochine pro-infiammatorie, chemochine e risposte a interferone di tipo I. La segnalazione di TLR4 interagisce inoltre con le cascate MAPK e con il priming dell’inflammasoma, modulando il reclutamento dei leucociti e il tono infiammatorio a livello tissutale. Un’attività di TLR4 deregolata è stata associata a fenotipi di malattie infiammatorie e infettive nel bovino, tra cui la mastite e risposte sistemiche guidate da endotossine, rendendolo un elemento rilevante per lo studio delle interazioni ospite–patogeno e dell’omeostasi immunitaria.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TLR4 (bovine) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene in linee cellulari bovine. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TLR4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di per lo studio della segnalazione di TLR4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni critici per la funzione di TLR4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TLR4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (bovine) e dal TLR4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (bovine2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus . Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TLR4 Plasmide HDR (bovine) e il plasmide HDR TLR4 (bovine2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.