Plasmide CRISPR/Cas9 KO TLR4 (bovine): sc-437333

Présentation

Le récepteur Toll-like 4 (TLR4) est un récepteur de reconnaissance des motifs (PRR) qui détecte le lipopolysaccharide ainsi que d’autres ligands associés aux agents pathogènes et aux dommages, afin d’initier la signalisation de l’immunité innée dans les cellules myéloïdes et épithéliales bovines. La liaison du ligand déclenche des voies dépendantes de MyD88 et de TRIF, activant des programmes transcriptionnels régulés par NF-κB et les facteurs IRF, qui contrôlent la production de cytokines pro-inflammatoires, de chimiokines et les réponses à l’interféron de type I. La signalisation de TLR4 s’articule également avec les cascades MAPK et l’amorçage de l’inflammasome, modulant le recrutement des leucocytes et l’intensité de l’inflammation au niveau tissulaire. Une activité de TLR4 dérégulée a été associée à des phénotypes de maladies inflammatoires et infectieuses chez les bovins, notamment la mammite et les réponses systémiques induites par les endotoxines, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des interactions hôte–pathogène et de l’homéostasie immunitaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TLR4 (bovine) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène dans les lignées cellulaires bovine. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du , ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TLR4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en pour l'étude de la signalisation de TLR4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de essentiels à la fonction de TLR4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TLR4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (bovine) et le TLR4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (bovine2) ciblent des sites distincts au sein du locus . Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TLR4 plasmide HDR (bovine) et le TLR4 (bovine2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.