Particules Lentivirales d'Activation (h2) TLR3: sc-400512-LAC-2

Le gène humain TLR3 (Toll-like receptor 3) code un récepteur endosomal de reconnaissance des motifs qui détecte l’ARN viral double brin ainsi que l’analogue synthétique poly(I:C), déclenchant une signalisation de l’immunité innée via l’adaptateur TRIF afin d’activer IRF3/IRF7 et NF-κB et d’induire des interférons de type I et des cytokines pro-inflammatoires. L’activité de TLR3 s’articule avec des programmes de restriction antivirale, la maturation des cellules dendritiques et des réseaux transcriptionnels inflammatoires, et peut moduler les voies de mort cellulaire dans certains contextes de stress. Des variations génétiques ou une signalisation TLR3 dérégulée ont été associées à une susceptibilité modifiée aux infections virales et à des phénotypes inflammatoires à médiation immunitaire, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des interactions hôte–pathogène, de la biologie des interférons et de la neuroinflammation. L’édition génomique de TLR3 permet une dissection mécanistique de la détection endosomale des acides nucléiques, des interactions entre voies de signalisation avec RIG-I/MDA5, ainsi que des criblages de génomique fonctionnelle dans des modèles immunitaires et épithéliaux.

Les particules d'activation lentivirales TLR3 (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TLR3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales TLR3 (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TLR3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de TLR3. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TLR3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.