Plasmide CRISPR/Cas9 KO TLE3 (h): sc-400386

Présentation

TLE3 (transducin-like enhancer of split 3) code un corépresseur transcriptionnel de la famille Groucho/TLE qui se lie à des facteurs associés à l’ADN tels que TCF/LEF, HES/HEY et d’autres régulateurs de lignée afin de moduler les programmes d’expression génique au cours du développement et de l’homéostasie tissulaire. En recrutant des complexes de modification de la chromatine, TLE3 influence la transcription dépendante de la voie Wnt/β-caténine, les effecteurs de la voie Notch, ainsi que d’autres voies liées à la différenciation. Une activité altérée de TLE3 a été associée à une dérégulation des décisions de destinée cellulaire, du contrôle de la prolifération et à une reprogrammation transcriptionnelle observées dans de multiples contextes pathologiques, notamment en cancérologie et dans des phénotypes métaboliques. Ces propriétés font de TLE3 une cible utile pour disséquer les interactions entre voies de signalisation et le contrôle épigénétique d’une transcription spécifique au contexte.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TLE3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TLE3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TLE3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TLE3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TLE3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TLE3 pour l'étude de la signalisation de TLE3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TLE3 essentiels à la fonction de TLE3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TLE3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TLE3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TLE3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TLE3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TLE3 plasmide HDR (h) et le TLE3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TLE3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TLE3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.