Plasmide CRISPR/Cas9 KO TLE2 (m): sc-423413

Présentation

Tle2 code le corépresseur transcriptionnel TLE2, une protéine de la famille Groucho/TLE qui sert d’échafaudage à des complexes de chromatine répressifs afin de moduler, selon le contexte, des programmes d’expression génique au cours du développement et de l’homéostasie tissulaire. TLE2 interagit avec des facteurs de transcription spécifiques de séquence et intègre des signaux issus notamment des voies Wnt/β-caténine et Notch, orientant les décisions de destinée cellulaire, la différenciation et le maintien des cellules souches/progénitrices. Dans des modèles murins et des systèmes cellulaires, une altération de l’activité de TLE2 peut perturber la spécification des lignages et le contrôle de la prolifération, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier les mécanismes à l’origine de réseaux transcriptionnels dérégulés dans les troubles du développement et les voies associées au cancer. Ses fonctions de corépresseur nucléaire en font également un nœud utile pour disséquer la régulation épigénétique et la dynamique de la répression transcriptionnelle.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TLE2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tle2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tle2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tle2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TLE2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tle2 pour l'étude de la signalisation de TLE2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tle2 essentiels à la fonction de TLE2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tle2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TLE2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TLE2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tle2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TLE2 plasmide HDR (m) et le TLE2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tle2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tle2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.