Plasmide CRISPR/Cas9 KO TIP39 (h): sc-405791

Présentation

L’hormone parathyroïdienne 2 (PTH2) code le peptide tubéro-infundibulaire de 39 acides aminés (TIP39), un neuropeptide qui agit comme ligand endogène du récepteur 2 de l’hormone parathyroïdienne (PTH2R), un RCPG de classe B. La signalisation TIP39–PTH2R est principalement couplée à l’axe AMPc/PKA et peut également engager des voies dépendantes du calcium, modulant ainsi l’excitabilité neuronale et les sorties neuroendocrines dans les circuits hypothalamiques et limbiques. En biologie humaine, PTH2/TIP39 a été associé à la modulation de la nociception, des réponses au stress, de la thermorégulation et du contrôle de l’axe reproducteur via la communication neuropeptidergique. La dérégulation de ces voies fournit un cadre mécanistique pour étudier le traitement sensoriel et les phénotypes neuroendocriniens dans des modèles pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TIP39 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PTH2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PTH2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PTH2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TIP39.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PTH2 pour l'étude de la signalisation de TIP39, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PTH2 essentiels à la fonction de TIP39
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PTH2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TIP39 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TIP39 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PTH2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TIP39 plasmide HDR (h) et le TIP39 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PTH2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PTH2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.