TIP30 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406742-ACT

HTATIP2 codifica a TIP30, um fator com características de supressor tumoral implicado na regulação transcricional, na sinalização apoptótica e no controle do tráfego endocítico. A TIP30 tem sido associada à modulação da internalização do EGFR e dos efeitos a jusante das vias MAPK/ERK e PI3K/AKT, influenciando assim a proliferação, a migração e as respostas ao estresse celular. Alterações na expressão de TIP30 foram relatadas em múltiplos contextos de câncer e estão associadas a mudanças no potencial metastático e na resistência à apoptose, sustentando sua ampla relevância em estudos de redes de sinalização oncogênica. Como produto gênico humano, a TIP30 também é utilizada para investigar programas transcricionais dependentes do contexto e a comunicação cruzada entre vias (crosstalk) em sistemas-modelo epiteliais e derivados do sistema imune.

TIP30 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HTATIP2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TIP30 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HTATIP2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HTATIP2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TIP30. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HTATIP2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TIP30 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TIP30 em células tumorais com expressão de HTATIP2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.