Plasmide CRISPR/Cas9 KO TIMP-4 (h): sc-402560

Présentation

TIMP4 code l’inhibiteur tissulaire des métalloprotéinases-4 (TIMP-4), un inhibiteur endogène sécrété qui se lie aux métalloprotéinases matricielles (MMP) et en limite l’activité afin de réguler le renouvellement de la matrice extracellulaire (MEC). En modulant la protéolyse péricellulaire, TIMP-4 influence l’adhérence et la migration cellulaires, ainsi que les programmes de remodelage tissulaire à l’interface avec la signalisation MEC–intégrines, les signaux inflammatoires et la disponibilité des facteurs de croissance. Une expression altérée de TIMP4 ou un déséquilibre TIMP/MMP est fréquemment étudié dans des contextes de fibrose, de remodelage vasculaire et de dynamique du microenvironnement tumoral, où la composition de la MEC et l’activité protéasique façonnent les phénotypes cellulaires. TIMP-4 participe également au contrôle du traitement, dépendant des protéases, de molécules bioactives, ce qui le rend pertinent pour la cartographie des voies en biologie de la matrice et en protéostasie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TIMP-4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TIMP4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TIMP4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TIMP4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TIMP-4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TIMP4 pour l'étude de la signalisation de TIMP-4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TIMP4 essentiels à la fonction de TIMP-4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TIMP4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TIMP-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TIMP-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TIMP4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TIMP-4 plasmide HDR (h) et le TIMP-4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TIMP4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TIMP4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.