Plasmide Double Nickase (h) TIM-3: sc-416365-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) TIM-3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TIM-3 Double Nickase (h) et le plasmide TIM-3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant HAVCR2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: TIM-3 Antibody (182H2B): sc-517632
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) TIM-3 | sc-416365-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) TIM-3 | sc-416365-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HAVCR2 code pour la protéine humaine 3 contenant un domaine immunoglobuline et un domaine mucine (TIM-3), un récepteur immunorégulateur exprimé par les lymphocytes T activés, les lymphocytes T régulateurs, les cellules NK et des populations myéloïdes. TIM-3 se lie à des ligands tels que la galectine-9, la phosphatidylsérine, CEACAM1 et HMGB1 afin de moduler la signalisation du récepteur des cellules T, la fonction de la synapse immunologique, la production de cytokines et des décisions de destin cellulaire associées à l’épuisement et à la tolérance. Par des interactions avec les réseaux de points de contrôle immunitaires et les programmes de signalisation inflammatoire, TIM-3 influence la présentation de l’antigène et les réponses effectrices dans des contextes de stimulation immunitaire chronique. Une activité dérégulée de HAVCR2/TIM-3 a été associée à une homéostasie immunitaire altérée en immuno-oncologie, lors d’infections virales chroniques et d’inflammation auto-immune, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques de la régulation immunitaire.
TIM-3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HAVCR2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HAVCR2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HAVCR2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HAVCR2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.