Plasmide CRISPR/Cas9 KO TIG2 (h): sc-403443

Présentation

RARRES2 code le gène 2 induit par le tazarotène (TIG2), également appelé chémérine, une adipokine sécrétée et un chimiotactique qui signale principalement via CMKLR1 et des récepteurs apparentés afin de coordonner le trafic des leucocytes et la surveillance immunitaire des tissus. TIG2 influence les cascades inflammatoires, la différenciation des adipocytes et l’homéostasie métabolique, reliant la biologie du tissu adipeux à la signalisation de l’immunité innée et à la fonction endothéliale. Une expression dérégulée de RARRES2/TIG2 a été associée à l’inflammation chronique et à des troubles métaboliques, et a été étudiée dans des contextes tels que l’obésité, la résistance à l’insuline et la physiopathologie cardiovasculaire. En biologie du cancer, la signalisation de la chémérine est étudiée pour ses rôles dans le façonnage du microenvironnement tumoral et la modulation du recrutement des cellules immunitaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TIG2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RARRES2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RARRES2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RARRES2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TIG2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RARRES2 pour l'étude de la signalisation de TIG2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RARRES2 essentiels à la fonction de TIG2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RARRES2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TIG2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TIG2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RARRES2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TIG2 plasmide HDR (h) et le TIG2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RARRES2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RARRES2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.