Plasmide CRISPR d'Activation (h) TIF1γ: sc-403230-ACT

TRIM33 (TIF1γ) code un corégulateur transcriptionnel à motif tripartite qui associe une activité de ligase ubiquitine liée à la chromatine à une régulation génique dépendante des signaux. TIF1γ module la signalisation TGF-β/BMP médiée par les SMAD, influence l’élongation transcriptionnelle et le remodelage de la chromatine, et participe aux réponses aux dommages de l’ADN via la régulation de complexes protéiques nucléaires. En ajustant des programmes transcriptionnels spécifiques de lignée et les décisions de destin cellulaire, TRIM33 est étudié dans des contextes tels que la différenciation hématopoïétique, la transition épithélio-mésenchymateuse et les réseaux de signalisation du stress. Une dérégulation de la fonction de TRIM33 et une altération de la sortie de la voie TGF-β ont été associées à la biologie tumorale ainsi qu’à d’autres troubles impliquant un contrôle transcriptionnel aberrant.

TIF1γ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TRIM33 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TIF1γ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TRIM33 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TRIM33, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TIF1γ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TRIM33 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TIF1γ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TIF1γ dans les cellules tumorales présentant une expression de TRIM33 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.