Plasmide CRISPR d'Activation (h) TIF1α: sc-403838-ACT

TRIM24 (TIF1α) est un co-régulateur transcriptionnel nucléaire qui intègre des signaux liés à la chromatine avec la signalisation hormonale et celle des facteurs de croissance afin de moduler des programmes d’expression génique contrôlant la prolifération, la différenciation et les réponses au stress cellulaire. Il contient un module PHD-bromodomaine qui reconnaît des modifications spécifiques des histones, reliant l’état épigénétique au recrutement de la machinerie transcriptionnelle au niveau des régions promotrices et des enhancers. TRIM24 influence des voies impliquant la signalisation des récepteurs nucléaires et le remodelage de la chromatine, et une activité ou une expression altérée de TRIM24 a été associée à des réseaux transcriptionnels dérégulés dans la biologie du cancer et d’autres maladies caractérisées par un contrôle épigénétique aberrant. En tant que membre de la famille des ligases E3 de l’ubiquitine, il peut également interagir avec la stabilité des protéines et le renouvellement des cofacteurs, offrant un lien mécanistique entre la régulation de la chromatine et la protéostasie.

TIF1α Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TRIM24 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TIF1α Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TRIM24 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TRIM24, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TIF1α. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TRIM24 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TIF1α au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TIF1α dans les cellules tumorales présentant une expression de TRIM24 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.