Plasmide CRISPR d'Activation (h) TIAR: sc-401247-ACT

Le gène humain **TIAL1** code **TIAR**, une protéine liant l’ARN qui reconnaît des éléments riches en uraciles (U) afin de réguler l’épissage du pré-ARNm, la stabilité des ARNm et la traduction. TIAR est un composant essentiel des granules de stress et participe à des programmes de contrôle post-transcriptionnel qui remodèlent l’expression génique lors du stress cellulaire, de la signalisation de l’immunité innée et de l’apoptose. En modulant des transcrits liés aux cytokines et à la croissance, TIAR contribue à coordonner le métabolisme de l’ARN avec les voies de signalisation qui gouvernent la prolifération et les réponses inflammatoires. Une activité de TIAR dérégulée et une dynamique anormale des granules de stress ont été associées à la neurodégénérescence, à l’auto-immunité et à des phénotypes pertinents pour le cancer, faisant de **TIAL1** un nœud utile pour étudier les réseaux de régulation de l’ARN et les changements transcriptomiques associés aux maladies.

TIAR Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TIAL1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TIAR Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TIAL1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TIAL1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TIAR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TIAL1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TIAR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TIAR dans les cellules tumorales présentant une expression de TIAL1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.