Plasmide CRISPR d'Activation (h) Thyroglobulin: sc-401985-ACT

TG code pour la thyroglobuline, une grande glycoprotéine sécrétée produite par les cellules folliculaires de la thyroïde, qui sert de principal support (échafaudage) pour la biosynthèse des hormones thyroïdiennes. Dans la lumière folliculaire, l’iodation et le couplage de résidus tyrosyle sur la thyroglobuline permettent la production de T3 et de T4 et s’intègrent au transport de l’iode, à l’activité de la thyroperoxydase et aux programmes de différenciation thyroïdienne pilotés par la TSH. L’expression et la maturation de TG sont liées au repliement des protéines et au contrôle qualité du réticulum endoplasmique, ainsi qu’au trafic vésiculaire qui régissent la sécrétion de thyroglobuline et l’homéostasie du colloïde. La dérégulation de TG est associée à des défauts héréditaires de la synthèse des hormones thyroïdiennes et présente un intérêt pour l’étude des dysfonctions thyroïdiennes, de la biologie des autoantigènes et de l’identité des cellules folliculaires.

Thyroglobulin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TG sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Thyroglobulin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TG dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TG, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Thyroglobulin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TG natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Thyroglobulin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Thyroglobulin dans les cellules tumorales présentant une expression de TG silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.