Plasmide Double Nickase (h) Thrombospondin 5: sc-402797-NIC

COMP code la thrombospondine 5, une glycoprotéine pentamérique sécrétée de la matrice extracellulaire, abondante dans le cartilage et d’autres tissus conjonctifs. La thrombospondine 5 participe à l’assemblage et au maintien de la matrice en se liant aux collagènes, aux protéoglycanes et aux intégrines, influençant ainsi l’adhésion des chondrocytes, la mécanotransduction et l’organisation de la matrice extracellulaire. Par ses effets sur l’architecture du cartilage et sur des processus liés à l’ossification endochondrale, COMP est associée à des voies qui régissent le développement squelettique et l’intégrité tissulaire. La perturbation génétique ou la dérégulation de COMP est associée à des dysplasies squelettiques héréditaires et à des phénotypes de dégénérescence du cartilage, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la biologie de la matrice extracellulaire et des mécanismes des maladies du tissu conjonctif.

Thrombospondin 5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus COMP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de COMP. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de COMP. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de COMP.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.