Plasmide CRISPR/Cas9 KO Thrombospondin 5 (h): sc-402797

Présentation

COMP code la thrombospondine 5, une glycoprotéine pentamérique de la matrice extracellulaire fortement enrichie dans le cartilage et les tendons, qui soutient l’assemblage de la matrice et la biomécanique tissulaire. La thrombospondine 5 interagit avec les collagènes, les protéoglycanes et des récepteurs de surface cellulaire afin de moduler l’adhérence des chondrocytes, la mécanotransduction et l’organisation de la matrice extracellulaire. Elle contribue à l’homéostasie du cartilage en influençant la fibrillogenèse du collagène et les voies de renouvellement de la matrice qui façonnent le développement squelettique et l’intégrité des articulations. Un dérèglement de la fonction de COMP et du dépôt de matrice est associé à des dysplasies squelettiques héréditaires et à des phénotypes cartilagineux dégénératifs, ce qui en fait un nœud d’étude utile pour la biologie de la matrice extracellulaire musculosquelettique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Thrombospondin 5 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène COMP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du COMP, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert COMP à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Thrombospondin 5.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en COMP pour l'étude de la signalisation de Thrombospondin 5, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de COMP essentiels à la fonction de Thrombospondin 5
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de COMP pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Thrombospondin 5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Thrombospondin 5 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus COMP. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Thrombospondin 5 plasmide HDR (h) et le Thrombospondin 5 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie COMP pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles COMP définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.