Plásmido CRISPR de Activación (h) Thrombospondin 5: sc-402797-ACT

COMP codifica la trombospondina 5, una glicoproteína matricelular pentamérica altamente enriquecida en la matriz extracelular del cartílago y que contribuye a la fibrilogénesis del colágeno, el ensamblaje de la matriz y la mecanotransducción en los tejidos musculoesqueléticos. Mediante interacciones con colágenos, proteoglucanos y receptores de superficie celular, la trombospondina 5 influye en la adhesión de los condrocitos y en vías de señalización que coordinan la proteostasis del retículo endoplásmico y la homeostasis de la matriz extracelular. La desregulación o las variantes patogénicas en COMP se asocian con displasias esqueléticas y fenotipos articulares degenerativos, lo que vincula la alteración de la organización de la matriz con un deterioro de la función del cartílago. Como regulador asociado a la matriz, COMP se estudia ampliamente en la biología del cartílago, el desarrollo del tejido conectivo y modelos de remodelación de la matriz extracelular.

Thrombospondin 5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de COMP sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Thrombospondin 5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus COMP en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional COMP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Thrombospondin 5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo COMP y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Thrombospondin 5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Thrombospondin 5 en células tumorales con expresión de COMP silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.